Správa o výsledkoch genetickej analýzy vzoriek tkanív múmií nájdených v Peru. Táto správa bola pripravená v novembri 2018.
účinkujúci
- Laboratóriá CEN4GEN (6756 - 75 Street NW Edmonton, AB Kanada T6E 6T9) - Príprava a sekvenovanie vzoriek.
- ABRAXAS BIOSYSTÉMY SAPI DE CV (Mexiko) - analýza počítačových údajov.
Po predbežnej analýze kvality sa odobrali 3 vzorky zo 7 predložených vzoriek na ďalšiu analýzu.
Vzorky na analýzu
označenie | pôvodné meno | Podmienené meno | obrázok |
Starovekých-0002 | Neck Bone Med Seating 00-12 Victoria 4 | Victoria | Obr. 3.117 |
Ancient-0003 | 1 Hand 001 | Oddeľte ruku 3 prstami | Obrázok 3.118 |
Starovekých-0004 | Momia 5 - DNA | Victoria | Obr. 3.117 |
Pre tieto vzorky sa vykonali nasledujúce operácie:
Propagačné video:
- Extrakcia DNA.
- Kontrola kvality DNA.
- DNA množenie.
- Tvorba knižnice DNA.
- DNA sekvenovanie.
- Tvorba vyčistených sekvenovaných údajov.
- Kontrola kvality.
- Predbežná analýza prekrývaním DNA ukazuje na ľudský genóm.
- Analýza izolácie krátkej DNA je typická pre starú DNA.
- Prekrytie DNA Ancient0003 sa číta na existujúcich knižniciach ľudského genómu.
- Mitochondriálna analýza na detekciu variantov D-slučky a ďalších informačných miest na stanovenie mitochondriálnych haplotypov.
- Stanovenie pohlavia vzoriek.
- Identifikácia možných cudzích organizmov vo vzorkách.
- Analýza DNA databáz na identifikáciu podobností so známymi organizmami.
Obrázok 3.117. Extrakcia vzoriek z krku Victoria.
Aby sa identifikovali možné typy organizmov prítomných vo vzorkách Ancient0004 a Ancient0002 (Victoria), uskutočnil sa skicovanie DNA (Ondov et al., 2016), v ktorom sa porovnávali skupiny krátkych fragmentov, k-mers, s dostupnými databázami. Bol použitý softvér BBTools.
Testovali sa nasledujúce organizmy:
- Baktérie.
- Vírus.
- Plazmidy.
- Fágy.
- Huby.
- Plastidov.
- Rozsievky.
- Human.
- Bos Taurus.
- H penzbergensis.
- PhaseolusVulgaris.
-
Mix2: Označte nasledujúce genómy:
- Chloroplast Lotus japonicus, úplný genóm.
- Canis lupus acquis cOR9S3P čuchový receptor rodiny 9 podrodiny S pseudogén (cOR9S3P) na chromozóme 25.
- Mitochondrie Vigna radiata, kompletný genóm.
- Millettia pinnata chloroplast, úplný genóm.
- Curvibacter lanceolatus ATCC 14669 F624DRAFT_scaffold00015.15, celá genómová brokovnica.
- Asinibacterium sp. OR53 skafold1, celá sekvencia brokovnice celého genómu.
- Kmeň Bacillus firmus LK28 32, sekvencia brokovnice celého genómu.
- Chloroplast Bupleurum falcatum, kompletný genóm.
- Alicycliphilus sp. B1, celá genómová brokovnica.
- Kmeň Bacillus litoralis C44 Scaffold1, sekvencia brokovnice celého genómu.
- Kmeň Chryseobacterium takakiae DSM 26898, celá genómová brokovnica.
- Paenibacillus sp. FSL R5-0490.
- Kmeň Bacillus halosaccharovorans DSM 25387 Scaffold3, sekvencia brokovnice celého genómu.
- Baktéria Rhodospirillales URHD0017, sekvencia brokovnice celého genómu.
- Kmeň Bacillus onubensis 10J4 10J4_trimmed_contig_26, úplná sekvencia brokovnice celého genómu.
- Radyrhizobium sp. MOS004 mos004_12, celá genómová brokovnica.
- Bacillus sp. UMB0899 ERR1203650.17957_1_62.8, celá broková sekvencia celého genómu.
-
Stavovce: Štítok pre nasledujúce genómy:
- Amblyraja-radiata_sAmbRad1_p1.fasta.
- bStrHab1_v1.p_Kakapo.fasta.
- bTaeGut1_v1.p_ZebraFinch.fasta.
- GCA_000978405.1_CapAeg_1.0_genomic_CapraAegagrus.fna.
- GCA_002863925.1_EquCab3.0_genomic_Horse.fna.
- GCF_000002275.2_Ornithorhynchus_anatinus_5.0.1_genomic.fna.
- GCF_000002285.3_CanFam3.1_genomic.fna.
- Macaco_GCF_000772875.2_Mmul_8.0.1_genomic.fna.
- rGopEvg1_p1_Gopherus_evgoodei_tortuga.fasta.
- Prvoky.
Obrázok 3.118. Obrázok a röntgenový snímok rúk s dvoma prstami.
Po všetkých filtroch bolo prijatých 27974521 čítaní pre Ancient0002 a 304785398 čítaní pre Ancient0004. To ukazuje, že 27% DNA zo vzorky Ancient0002 a 90% DNA zo vzorky Ancient0004 sa nedá identifikovať z vzoriek DNA analyzovaných organizmov z dostupných databáz.
Ďalšia fáza analýzy sa uskutočnila pomocou softvéru megahit v1.1.3 (Li et al., 2016). Bol získaný nasledujúci výsledok:
- Ancient0002: 60852 kontigov, celkom 50459431 bp, min. 300 bp, maximum 24990 bp, priem. 829 bp, N50 868 bp, 884,385 (5,39%) zčítaných údajov.
- Ancient0003: 54273 kontigov, celkom 52727201 bp, min. 300 bp, maximum 35094 bp, priemer 972 bp, N50 1200 bp, 20 247 568 (65,69%) zoskupených čítaní.
Výsledok analýzy je znázornený na obrázku.
Obrázok 3.116. Pomer klasifikovaných odpočtov pre 28073655 Ancient0002 čítaní (horný graf) a 25084962 Ancient0004 čítaní (spodný graf) v porovnaní s 34904805 DNA bázou predstavujúcou 1109518 taxonomických skupín.
záver
Ako výsledok analýzy sa ukázalo, že vzorky Ancient0002 a Ancient0004 (Victoria) nezodpovedajú ľudskému genómu, zatiaľ čo vzorka Ancient0003 dobre zodpovedá ľudskému.
Komentár Korotkov K. G
Všimnite si, že ruka s tromi prstami patrila veľkému stvoreniu, čo do veľkosti bola porovnateľná s Máriou, a získaný výsledok zodpovedá výsledku analýzy DNA DNA. Victoria je predstaviteľkou „malých stvorení“a výsledok ukazuje, že ich DNA nezodpovedá žiadnym moderným pozemským tvorom. Nemáme, samozrejme, údaje o starodávnych tvoroch, ktoré zmizli po milióny rokov.
odkazy
- Corvelo, A., Clarke, WE, Robine, N., & Zody, MC (2018). taxMaps: komplexná a vysoko presná taxonomická klasifikácia krátkych údajov v primeranom čase. Genome Research, 28 (5), 751-758.
- Gamba, C., Hanghøj, K., Gaunitz, C., Alfarhan, AH, Alquraishi, SA, Al-Rasheid, KAS, … Orlando, L. (2016). Porovnanie výkonnosti troch antických metód extrakcie DNA pre vysoko výkonné sekvenovanie. Molecular Ecology Resources, 16 (2), 459-469.
- Huang, W., Li, L., Myers, JR, a Marth, GT (2012). UMENIE: simulátor na čítanie sekvencií novej generácie. Bioinformatics, 28 (4), 593-594.
- Li, D., Luo, R., Liu, C.-M., Leung, C.-M., Ting, H.-F., Sadakane, K., … Lam, T.-W. (2016). MEGAHIT v1.0: Rýchly a škálovateľný metagenómový assembler poháňaný pokročilými metodikami a komunitnými postupmi. Methods, 102, 3-11.
- Ondov, BD, Treangen, TJ, Melsted, P., Mallonee, AB, Bergman, NH, Koren, S. a Phillippy, AM (2016). Mash: rýchly odhad genómu a metagenómu pomocou MinHash. Genome Biology, 17 (1), 132.
- Schubert, M., Ermini, L., Der Sarkissian, C., Jónsson, H., Ginolhac, A., Schaefer, R., … Orlando, L. (2014). Charakterizácia starodávnych a moderných genómov detekciou SNP a fylogenomickou a metagenomickou analýzou pomocou PALEOMIX. Nature Protocols, 9 (5), 1056-1082.
- Weissensteiner, H., Forer, L., Fuchsberger, C., Schöpf, B., Kloss-Brandstätter, A., Specht, G., … Schönherr, S. (2016). mtDNA-Server: sekvenčná analýza dát ďalšej generácie ľudskej mitochondriálnej DNA v oblaku. Nucleic Acids Research, 44 (W1), W64-W69.
- Zhang, J., Kobert, K., Flouri, T. a Stamatakis, A. (2014). PEAR: rýchla a presná zlučovacia reklama Illumina Paired-End. Bioinformatics, 30 (5), 614-620.
Materiály poskytnuté Konstantinom Georgievičom Korotkovom (doktor technických vied, profesor, Univerzita informačných technológií, mechaniky a optiky) a Dmitrijom Vladislavovičom Galetským (kandidát lekárskych vied, I. P. Pavlov 1. Štátna lekárska univerzita v Petrohrade)